Kolorimetrická metóda chemickej analýzy krvi

Kolorimetrická metóda je analýza založená na porovnaní sýtosti farieb študovanej a známej látky. Výsledky fyzikálno-chemických testov majú veľkú hodnotu pre mnohé odvetvia vedy, ale predovšetkým sa výskum používa v medicíne.

Podstata kolorimetrickej metódy

Existuje mnoho typov analýz, pomocou ktorých sa určuje chemické zloženie látok. Niektoré z nich sú univerzálne a široko používané v rôznych oblastiach, iné sú špecifické, s vyššou presnosťou. Kolorimetrická metóda sa vzťahuje na univerzálne.

Podstata analýzy spočíva v tom, že sýtosť farieb roztoku s neznámou koncentráciou sa porovnáva s farbou štandardného roztoku. Počas analýzy sa v dôsledku interakcie študovanej zložky s určitým činidlom vytvorí farebná zlúčenina. Po dokončení reakcie sa výsledný odtieň porovná s farbou roztokov, ktorých koncentrácia je už známa.

Predpokladá sa, že zakladateľom kolorimetrie je Robert Boyle. Na rozlíšenie železa od medi v roztoku použil stlačenie trieslovín. , bol to Boyle kto si všimol, že čím väčšia je koncentrácia železa v roztoku, tým bohatší je jeho tón.

Kolorimetria

Kolorimetria je metóda na stanovenie množstva látky v roztokoch. Analýza je založená na zákone Booger-Lambert-Behr: keď lúč svetla zasiahne hustú absorbujúcu vrstvu hmoty, jeho intenzita slabne.

Kolorimetrická metóda na stanovenie koncentrácie látky môže použiť vizuálne porovnanie alebo porovnanie pomocou špeciálnych zariadení na meranie intenzity farieb. Porovnanie sa vykonáva priamym a kompenzačným spôsobom.

1. Postupka. Metóda zahŕňa porovnanie úrovne farby testovaného roztoku pri určitej hustote a teplote kvapaliny s referenčným roztokom. Pri použití fotokolorimetrov a spektrofotometrov sa ako referenčný roztok používa destilovaná voda. Zariadenia merajú prúdovú silu, ktorá závisí od intenzity svetla.
2. Náhrada. Metóda je založená na prenesení farby študovanej vzorky na referenciu. jeden. Výsledok sa dosiahne pridaním rozpúšťadla alebo zvýšením výšky vrstvy média, ktoré sa má natrieť.

Použitie spektrofotometra, monochromátora a iných presných prístrojov ďalej zjednodušuje už jednoduché metóda výskumu a umožňuje vám zvýšiť presnosť výsledkov. Tieto zariadenia sú schopné merať množstvo prenosu svetla a určiť vlnovú dĺžku.

Kde sa analýza uplatňuje

Kolorimetrická metóda analýzy sa používa, keď je známe presné chemické zloženie, existuje referenčná vzorka na porovnanie a teplota testu a referenčnej vzorky je rovnaká. Ak je potrebné rýchlo určiť množstvo farebnej látky, je taká malá, že nie je možné použiť analytickú metódu.

Kolorimetria je široko používaná v medicíne v klinickom biochemickom výskume a v iných oblastiach:

• farmakologický priemysel;
• potravinársky a alkoholový priemysel;
• agronómia (stanovenie kvality pôdy).

Výhody a nevýhody

Kolorimetrická metóda, ako každá iná, má klady a zápory.

Medzi výhody patrí:

• jednoduchosť analýzy, minimálne prípravné postupy;
• možnosť testovania aj s malým množstvom študovaného materiálu;
• nie je potrebné drahé vybavenie, aj keď moderné zariadenia, ktoré nie sú Lacné, sa v poslednej dobe čoraz viac používajú. Poskytujú však najpresnejší výsledok.

Nevýhody: presnosť analýzy je nízka v porovnaní s analytickými metódami.

Biuretická metóda stanovenia proteínu

Proteín v krvnom sére je indikátorom odrážajúcim stav homeostázy. Zvýšenie koncentrácie z vysokomolekulárnej zlúčeniny v krvi sa nazýva hyperproteinémia, nízky obsah je hypoproteinémia.

Proteíny v krvnom sére majú odlišné zloženie, štruktúru, vlastnosti a vykonávajú rôzne funkcie. Sú rozdelené na enzýmy, hormóny, imunoglobulíny a ďalšie. Pre všetky skupiny proteínov je spojených niekoľko spoločných charakteristík, na základe ktorých boli vyvinuté metódy na stanovenie vysokomolekulárnych organických zlúčenín v biologických tekutinách.

Zo všetkých metód v klinickej biochémii sa najčastejšie používajú kolorimetrické metódy stanovenia proteínov. Sú relatívne lacné, čo je dôležité pre rozpočtové organizácie. a sú celkom jednoduché. Najbežnejšia je biuretická metóda. Podstata metódy: proteíny v v alkalickom prostredí , reagujú so síranom meďnatým a tvoria fialové zlúčeniny. Obsah bielkovín v krvi je určený nasýtením farbenia. Biomateriál na analýzu sa užíva ráno na prázdny žalúdok.

Analýza je veľmi presná, existujú však faktory, ktoré ovplyvňujú koncentráciu bielkovín v krvi:

• fyzická aktivita krátko pred zberom biomateriálu;
• posledné týždne tehotenstva a laktácie;
• použitie liekov "kortikotropín", "Miscleron", "klofibrát" prispieva k zvýšeniu obsahu bielkovín v krvi a použitie "Pyrazinamidu" a estrogénu vedie k zníženiu koncentrácie;
• nesprávna poloha ruky počas zberu biomateriálu.

Stanovenie železa

Množstvo železa v krvi je jedným z hlavných ukazovateľov diagnostiky rôznych chorôb. Látka je koncentrovaná v hemoglobíne, ktorý zabezpečuje transport kyslíka do tkanív. Na stanovenie železa kolorimetrickou metódou sa ako hlavné činidlo najčastejšie používa roztok batofenantrolínu (0,02%. Biomateriál-sérum bez stôp hemolýzy.

Podstata metódy: počas interakcie iónov železnatého železa a sulfátovaného batofenantrolínu sa vytvára farebný komplex, ktorého saturácia sa určuje fotometricky. Na získanie priehľadného roztoku je potrebné dodržiavať pravidlá odberu vzoriek biomateriálov, ale na presné stanovenie optických hustôt komplexov železo-ligand sa železo uvoľňuje z hemoglobínu pomocou hydroxylamínu a detergentov (dodecylsulfát sodný). Podľa výsledku testu sa stanoví prítomnosť a stupeň patológie. Normálne by koncentrácia železa mala byť:

• 14, 2-26, 0 mmol / l (muži);
• 10, 6-21, 7 mmol / l (ženy).

Nedostatok železa je zvyčajne spojený so stratou krvi, nedostatočným príjmom s výživou alebo zlou absorpciou v gastrointestinálnom trakte.

Stanovenie cholesterolu

Cholesterol je organická látka obsiahnutá v bunkovom obale mnohých organizmov vrátane ľudí. To je potrebný na výrobu cholekalciferol a steroidné hormóny. Hladina cholesterolu 3,37-5,2 mmol / l sa považuje za normálnu. Preskočiť na obsah je jednou z hlavných príčin aterosklerózy.

Kolorimetrické metódy na stanovenie cholesterolu umožňujú rozpoznať cievne ochorenia v počiatočných štádiách. Podľa patoanatomických výsledkov bola koncentrácia lipofilného alkoholu u pacientov so smrteľnou ischémiou 6,5-7,8 mmol / l.

Princíp kolorimetrickej metódy spočíva v tom, že cholesterol sa oxiduje 3beta-hydroxy-steroidnou oxidoreduktázou s uvoľňovaním peroxidu vodíka, ktorý premieňa p-aminoatipyrín na farebnú zlúčeninu. Nasýtením jeho farby sa určuje obsah cholesterolu.

Pri vykonávaní testu u dieťaťa je potrebné vziať do úvahy, že koncentrácia cholesterolu v detstve by nemala presiahnuť 4,1 mmol / l.

Čo je enzymatická kolorimetrická metóda?

Enzymatické testy sú založené na použití reakcií enzýmami s vysokou aktivitou. Sú široko používané v analytickej chémii na stanovenie rôznych látok - od dusičnanových iónov po makromolekuly.

Enzymatické (enzymatické) metódy sa vyznačujú špecifickosťou, ktorá umožňuje analyzovať niektoré látky v prítomnosti iných látok podobného zloženia. Najbežnejšie metódy založené na použití enzýmu-glukózooxidázy. Test sa používa na stanovenie koncentrácie glukózy v krvi. Presnosť testu umožňuje jeho použitie na úpravu dávkovania hypoglykemických látok u pacientov s diabetes mellitus 2. typu.

Metóda oxidačného činidla glukózy sa považuje za jednu z najlepších kvantitatívnych metód na stanovenie glukózy. Ako biomateriál sa môže použiť krv (kapilárna) aj sérum, ale plazma je výhodnejšia, pretože má znížený obsah hematokritu, čo negatívne ovplyvňuje presnosť výsledku.

Používa sa hlavne kinetická metóda fotometrie. Jeho podstata spočíva v tom, že pri stanovenom pomere glukózooxidázy a peroxidázy bude po určitý čas po začiatku reakcie rýchlosť tvorby farebnej zlúčeniny úmerná hladine glukózy vo vzorke. Hlavnou výhodou testu je, že výsledok nie je ovplyvnený prítomnosťou zlúčenín tretích strán vo vzorke. Metóda má tiež nevýhodu – na vykonanie testu sú potrebné drahé meracie prístroje od nemeckých alebo švédskych výrobcov.

Záver

Kolorimetrická metóda sa vyznačuje presnosťou a ľahkosťou aplikácie. Jeho použitie v medicíne umožňuje identifikovať rôzne patologické zmeny v tele v počiatočnom štádiu. So zavedením nových technológií sa metóda zdokonaľuje a je čoraz viac žiadaná.